萊富生命科技股份有限公司  黃碩羿先生

　

醫研部第三共研新進一台Applied Biosystems™ Quantstudio 7 Flex是一款高階的real-time PCR系統（圖一）。相關儀器原理已於第十三期電子報詳盡介紹過，網址連結：https://ntuhmc.ntuh.gov.tw/epaper-13th.htm。

圖一

在同一台儀器，您可以自由的選擇使用96孔盤、384孔盤或微流道 TaqMan™ Array Card。(目前可使用之盤型有 96 well 0.1-ml/0.2-ml及TaqMan™ Array Card微流體陣列) 。讓實驗操作更便利。

儀器特色：

• 快速更換96、96 Fast與384微流體陣列三種反應槽

• 具備6組激發光和散發光濾片，可偵測多種螢光標的物

• 96 Fast反應槽僅需10 ul，可跑快速模式，大幅縮短實驗時間

• TaqMan微流體陣列可針對大量基因表現或microRNA分析，其反應體積僅需1uL，可減少檢體耗損，節省試劑成本

• 實驗應用：絕對定量 (Standard Curve)、相對定量 (△△ Ct Method & Relative Standard Curve)、Melting Curve Analysis、SNP genotyping Assay、Presence/Absence Assay (定性判讀)

若需使用不同的樣本盤，僅需更換樣本盤載具及加溫上蓋即可。簡易流程如下圖所示，詳細操作請依共儀管理方法進行：

圖二                                圖三

　

一、基因表現分析：

針對基本基因表現的實驗已成功研發超過180 萬個基因探針, 可協助研究人員省卻龐雜的引子與探針的設計問題, 快速獲致實驗成果。目前探針物種已擴充至Human, Mouse, Rat, Rice, Zebrafish, Cow, Chicken Dog, Arabidopsis, Drosophila, Pig, Rabbit…等31 個物種；除此之外，也同時提供針對human, mouse, rat篩選出參與特定的生理途徑 (pathway)，生物標記 (Biomarker)或是疾病研究的重要基因，並在 96孔盤或384孔盤中設置這些預先挑選基因所設計的 TaqMan® Gene Expression Assays 以及 endogenous controls，可快速精確的執行基因網絡分析。研究領域包含癌症、阿茲海默症、心臟肥大、糖尿病、亨丁頓舞蹈症、類風濕性關節炎等。

除了一般的mRNA及miRNA之外，long non-coding RNA的分析也越來越受到重視，其扮演的角色可能會以不同的方式直接影響mRNA或miRNA的表現量。如lncRNA可能藉由甲基化轉移酶結合，抑制特定基因表現，影響細胞老化；或是與mRNA結合，保護其不受RNase或miRNA的調控，探討腫瘤形成機制等應用。這個部份已針對human, mouse, rat提供27,000多種設計好的non-coding RNA探針可供研究者選擇。在這類需要同時分析大量不同目標表現量的應用，研究者更可以利用QuantStudio 7高通量的特性，進行快速的基因表現分析，有效的探討疾病成因或基因調控差異背後的形成機制（圖四）（圖五）。

圖四

圖五

　

二、Taqman Array Card 微流體陣列介紹

在real-time PCR實驗中，最常被使用的方法學有TaqMan® Assay探針和利用SYBR® Green染劑來進行這兩種方式。TaqMan® Assay探針方法除了具有能與目標序列結合的引子對之外，另外會包含一個位在上下游引子之間的探針序列（圖六），在實驗上比SYBR® Green有更高的專一性；不同TaqMan® Assay探針更可標定不同的螢光讓研究者可以在同一個反應槽裡去同時分析多個目標，達成multiplexing的訴求。

圖六

Taqman Array Card是一個具有微流道設計之384孔盤, 在不需額外自動化設備情況下，進行384個real-time PCR反應實驗。Taqman Array Card在每個反應槽裡預注了高品質的乾燥Taqman Assay (包含Taqman探針和PCR引子對)，可以直接針對1到8個樣本進行 12 到384個目標基因表現量的偵測分析（圖七）。由於這樣微流體的設計，Taqman Array Card讓使用者可以更容易的去維持實驗的一致性，大幅降低人為操作之影響，來進行需要高再現性和敏感度的實驗。

圖七

Taqman Array Card的操作流程非常的簡單。該卡有8個樣本槽，每一個槽會連接到一組獨立的48孔反應槽，每個反應槽的體積僅有1.5 ul。將實驗所需的cDNA樣品與Applied Biosystems™ TaqMan™ Universal Master Mix II均勻混和後，注入到每個樣本槽（圖八），與一般384孔盤分注樣本的方式不同，Taqman Array Card僅需要離心（圖九），樣本在離心的過程中便會經過微流道被平均的分注到各個反應槽內，無需單獨分注。離心完成後進行封片即完成全部的real-time PCR實驗準備步驟，流程快速且可以降低人為分注體積差異對實驗的影響。

圖八                                   圖九

 TOP  　

---