醫學研究部 核酸定序核心團隊

RNA in situ hybridization(ISH)是一種利用核酸序列互補特性來設計探針，標記互補的RNA，繼而將細胞或組織中目標RNA定位的一種技術。

早期的RNA-ISH會使用的放射性或螢光標定的分子將RNA進行定位，但缺乏靈敏度及特異性以外，也存在安全性的問題。為了解決靈敏度的問題，後續陸續發展出In Situ PCR、TSA assisted ISH、bDNA ISH及RCA ISH等原位放大RNA訊號的方法，但在探針專一性的部分，仍需要改善。直到2010年新一代RNA原位雜交（RNA in situ）技術推出。其利用獨特專利雙ZZ探針設計以及特殊信號放大方法確保檢測的高敏感度和特異性。獨特的探針設計，能放大目標基因的訊號並同時降低背景值；若只有單一Z探針產生非專一性結合時，無法與後續的信號放大的部分結合，以達到降低背景值的目地。

Fig.1新一代RNA原位雜交技術利用獨特專利雙ZZ探針設計以及特殊信號放大方法確保檢測的高敏感度和特異性。

   A                                                    B

Fig.2 A.雙ZZ探針與目標基因結合，搭配後續的訊號放大。B. 若只有單一Z探針產生非專一性結合時，無法與後續的信號放大的部分結合。

新一代RNA原位雜交（RNA in situ）技術提供在單一細胞、單一分子的解析度下，分析目標 RNA 的表現量。並適用於各種樣本組織切片，FFPE、Fresh frozen、Fix frozen 等等。此方法相較於傳統的ISH技術，除了大量縮短實驗時間之外(一天即可完成)，亦不需要RNase Free的環境。更能有效偵測檢體中微量的mRNA分子，使單個RNA分子於組織或細胞上顯現為一個單一的點，將目標mRNA的視覺化，得到定性、定量的結果數據。

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