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即時螢光定量PCR 技術概述：

聚合酶連鎖反應 (PCR) 是一種可將目標DNA或cDNA擴增至百萬倍的技術。 即時螢光定量 PCR則是在有螢光染劑存在下擴增特定基因目標，儀器可即時擷取螢光信號，測定每次PCR循環後DNA/cDNA產物量的變化。PCR反應的最佳效能，產物是以2ⁿ進行擴增。PCR產物會隨著PCR cycle數增加呈正相關增加，螢光訊號強度也隨之增加。然而，反應初期樣本中核酸含量較低，無法達到此理論值；反應後期，因為酵素、特定primer耗盡等因素，偵測到的螢光訊號會趨於平緩。因此只有反應中段是以2ⁿ進行擴增。在進行產物量分析時，僅會截取此反應中段進行分析。

即時螢光定量PCR技術，可用以比較相同基因在不同樣本的表現量差異，亦可準確推算測定樣本的核酸起始量。除可使用會與DNA結合之螢光染劑進行非專一性偵測外，亦可使用會與目標基因黏合的螢光探針，再利用儀器來偵測並記錄螢光訊號變化。

儀器介紹：

醫研部細胞治療中心新進一台QuantStudio™ 5 Dx Real‑Time PCR System，是一款兼具IVD和檢測開發(TD)模式的real-time PCR系統。其IVD模式可在專業實驗室環境中，由受過訓練人員操作，分析來自人類檢體的核酸，以偵測可能顯示疾病發生或易感性的基因資訊，進行體外診斷。即時螢光定量PCR技術目前被廣泛應用於檢測近期正影響全球的新冠肺炎。檢測開發模式，則可應用於下列研究應用領域：

• 基因表現

• 基因分型

• 拷貝數差異

• 病原體檢測、菌株分型和病毒量

• miRNA分析等

而細胞治療的相關應用則有：

• Stem cell marker expression and characterization

• 黴漿菌檢測

• HEK293 細胞 DNA殘留 (Residual host cell genomic DNA)

• 殘留 plasmid DNA 等

QuantStudio 5 Dx Real-Time PCR System搭載6個激發光 (450–680 nm) 和6個散發光 (500–730 nm) 濾光片組，在一次實驗中可同時擷取多種螢光訊號組合，適用於多套qPCR反應分析 (Multiplex qPCR)。儀器支援兩種以上的實驗試劑，包含TaqMan® 探針及SYBR® Green D系列試劑，在標準96孔反應槽內完成即時螢光定量PCR只需不到30分鐘。

為符合細胞治療中心實驗需求，儀器軟體包括安全和審核模組 (SAE)，以符合美國聯邦法規第21 章第 11 節 (21 CFR Part 11) 的特定要求。SAE軟體是一種工具，可協助實驗室管理者在軟體運行環境下達到特定的監管，並可自動記錄系統上的所有操作軌跡，以滿足法規之需求。

若使用IVD模式下將自動強制啟用SAE模組，即對軟體設定、操作進行監管並記錄，使用者僅能執行特定功能，所有實驗流程都必須依管理者設定進行，SAE模組功能之特色包含：

• 驗證使用者的登入資訊

• 紀錄未經授權的登入事件

• 使用者專屬的預設程式設定

• 偵測所有資料變更異動

• 紀錄使用者建立、刪除或更新資料的日期/時間

• 追蹤實驗建立與變更

• 追蹤系統設定變更事件

　

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