醫學研究部(Department of Medical Research)
 

共 同 研 究 室 電 子 報   

第四期 APR.10.2014

本期目錄

主編的話

流式細胞分選儀開放服務公告

顯微影像服務

科學新知

共同研究室貴重儀器
訓練暨研究新知課程

下期主題

研究服務項目: 
 16頻道生理紀錄儀

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主編的話

隨著時序進入春季,共同研究室的電子報也步入第四期囉!繼前面兩期電子報介紹過[核酸定序]及[自由基測定]的原理與服務之後,本期電子報的主題落在顯微影像的原理及服務介紹。此外,非常感謝台灣儀器行銷售工程師林育嘉小姐,為大家簡單的介紹顯微影像的新利器----影像擷取速度快且能拍攝微弱螢光的EMCCD。本期另一重大任務是公告臺大醫院醫學研究部的細胞分選儀服務開張囉!除了醫學院第一共研外,多了一個地方可以進行細胞分選服務,請大家多加使用並不吝給我們指正與鼓勵。

下期電子報將介紹16頻道生理記錄儀,該儀器可記錄小動物的生理訊號,如:血壓、血流、血氧濃度等。有需要的同仁請密切注意下期的共同研究室電子報喔!歡迎您訂閱共同研究室電子報以收取相關訊息,更歡迎您與我們聯絡,給我們鼓勵與建議。


流式細胞分選儀開放服務公告

共同研究室自410日起將提供流式細胞分選儀(Cell Sorter:BD FACSAria III)核心服務,同仁如有使用需求請先填寫NTUH cell sorter 帳號申請單送交第三共同研究室申請預約帳號,相關表單及使用方式臺大醫院同仁請至[醫院院內網Sorter預約系統]下載。其他醫學校區同仁請參照[醫學研究部流式細胞分選儀表單]說明網頁,有疑問請洽第三共研博士(分機65720)或歐陽小姐(分機65725)。謝謝!
 
                                        
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顯微影像服務

在各式各樣用來呈現研究結果的方法中,顯微影像有別於文字及數據,是屬於較直接明瞭的結果呈現,例如:細胞或組織的型態外觀、細胞是否表現目標物質、目標物在細胞或組織中的所在位置、目標物的染色訊號強弱變化等,而隨著光學技術的精進,顯微影像在研究領域的應用也越來越廣泛且普遍。目前在生物醫學研究方面,除了一般光學顯微鏡之外,最常用的便是雷射共軛焦顯微鏡,接下來就針對雷射共軛焦顯微鏡的原理進行說明。

一、雷射共軛焦顯微鏡原理

  在解釋雷射共軛焦顯微鏡的原理之前,先簡單說明一般光學顯微鏡的成像原理。在一般的光學顯微鏡,當光源照射樣本後,自樣本發出的光線會先經過物鏡進行第一次的影像放大,此時光線被調整成聚焦於無限遠處的平行光束。接著藉由tube lens 再次進行聚焦,此時影像聚焦的所在位置稱為 intermediate plane,該影像稱為 intermediate image。接著intermediate image便會透過目鏡成像於肉眼,或藉由CCD將該影像記錄下來。

雷射共軛焦顯微鏡的成像基本概念大致上和一般光學顯微鏡相同,不同的是雷射共軛焦顯微鏡係以雷射作為點光源,且雷射光束是以line scanning point scanning的方式循序對樣本進行照射掃描(而一般光學顯微鏡則是光源同時全面性的對樣本進行照射)。接著自樣本發出的光線會聚焦於intermediate plane,共軛焦顯微鏡在intermediate plane 的位置設置了 pinhole,只有可通過pinhole的光線會被感測器偵測記錄。由於pinhole的設置僅允許對焦面的光線通過,排除來自非對焦面的光線干擾,因此便達到影像澄清化的效果。Pinhole的孔徑相當小,能通過的光線看起來僅是一個光點,樣本的影像便是依序被分成一個個的光點,這些光點訊號被感測器收集後再透過電腦轉換成完整的影像,所以共軛焦顯微鏡係以point by point的方式記錄影像。由於共軛焦顯微鏡這樣的設計特性,對於需要觀察目標物精確所在位置、需排除非焦距面光線干擾、需掃描特定區域範圍、欲進行3D結構重組等較為複雜的樣本,能得到良好的觀察結果。然而需要特別提醒的是-共軛焦顯微鏡所收集的光訊號僅限於對焦位置,因此所獲得的光量較少,若是樣本本身螢光偏弱,則於共軛焦顯微鏡上所獲得的影像便會不清楚或有嚴重的背景雜訊,因此在使用共軛焦顯微鏡之前,建議先於一般顯微鏡觀察樣本的螢光強度,若有一定的螢光強度,再去使用共軛焦顯微鏡擷取影像。

一、顯微影像服務說明

(一)正立式共軛焦顯微鏡:

共同研究室目前配備有一臺正立式雷射共軛焦顯微鏡以提供顯微影像服務。

顯微鏡規格--

  • 機型:ZEISS LSM510 META

  • 雷射種類:458nm477nm488nm514nm561nm633nm405nm

  • 物鏡:10X20X40X63X100X

  • 適用樣本型式:玻片。

  • 應用:多重免疫螢光標定影像擷取、3D影像擷取與動畫呈現、FRET實驗、Photo-bleachingPhotoactivationPhotoconversion

  • 服務提供方式: LSM-510服務說明
     

(二)倒立式螢光顯微鏡:

顯微鏡規格--

  • 機型:ZEISS AXIOVERT 200M

  • 螢光燈源:汞燈

  • 物鏡:5X10X20X40X100X

  • 適用樣本型式:玻片、35mm dish、60mm dish、multiwell plate。

  • 應用:多重免疫螢光標定影像擷取、3D影像擷取與動畫呈現、活體動態影像擷取、矩陣掃描影像擷取、Multiwell多定點活體長期動態影像擷取FRET實驗。

  • 服務提供方式:倒立顯微鏡服務說明

目前我們正在進行倒立螢光顯微鏡升級配備的請購,期待能提供更優質的顯微影像服務。共同研究室顯微影像服務的負責技術人員為孫芸鈺小姐,分機:63206,若有任何問題,歡迎來電討論。

(
三)各共同研究室尚有其他機型顯微鏡,詳細規格訊息,請點選 :共同研究室功能類似儀器資料

(四)本部不定期舉辦教學訓練課程,歡迎訂閱共研電子報以收取相關訊息。部份課程備有教學影片,若有需要請洽儀器負責人。


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科學新知

Electron Multiplying Charge Coupled Device (EMCCD)

台灣儀器行 林育嘉小姐 
 

EMCCD (Electron Multiplying Charge Coupled Device)在硬體設計上相較於傳統的CCD,多了EM register的構造,以利用加強電壓的方式達到放大電子訊號的效果。由於其電子訊號的放大是發生在訊號讀出之前,所以EMCCD可放大訊號卻不會放大Readout noise,故可以得到高訊雜比的高品質影像。EMCCD可分為前照式及背照式兩種,前照式EMCCD的光電轉換效率(QE)大約為65%,而背照式EMCCD的光電轉換效率則可高達90%以上。這種高訊雜比、高敏感度的特性,讓EMCCD成為微弱螢光或需要快速拍照的實驗利器 。EMCCD可應用於偵測單分子、微弱光源樣本、離子信號、細胞內快速反應之影像記錄等方面,是現今逐漸普及使用的科學影像擷取設備。

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共同研究室貴重儀器訓練暨研究新知課程 

儀器訓練課程:課程網路報名

  4月16日 II級分析純水、超自動消毒模組之原理與應用(ElixMilli-Q AcademisystemA.S.M.)
  4月23~25日 流式細胞儀原理、應用與實機操作(BD FACSCalibur / LSRII)
     

研究新知課程:課程網路報名 

  4月22日  腫瘤標記與免疫因子的轉譯醫學研究探討生物因子的多重檢測在疾病研究中的運用 
  4月24日 新一代基因編輯技術介紹與應用RGENs (RNA Guided Endonucleases) CRISPR/CAS system
  4月29日 生物分子間交互作用偵測技術之最新發展與QCM的應用
  4月30日 細胞培養在微需氧環境的重要性與研究趨勢

歡迎您訂閱共同研究室電子報以收取儀器訓練與研究新知課程講習相關資訊 。

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為持續提供優質之研究服務,便於日後聘用專職技術人員、購置新儀器、現有儀器汰舊換新與維護保養等等,敬請於使用共同研究室資源並發表論文時,於論文致謝(Acknowledgement)處加入致謝共同研究室之文句,並於論文發表時通知共同研究室管理人員。致謝文句請依實際使用情形書寫,或請參考以下範例:We thank the staff of the Core Labs, Department of Medical Research, National Taiwan University Hospital for technical support.
 

第四期                                                                                                                                                                                                   APR.10.2014