醫學研究部 基因定序暨生化核心團隊

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在科學研究中，傳統Western blot (西方墨點法) 是廣泛應用的蛋白質分析技術，用於檢測特定蛋白質的存在、大小和表達量，然而傳統西方墨點法存在著步驟繁瑣、再現性較差、需大量樣品、時間耗費久、大小分子量轉漬程度不一、通量低、定量結果分析主觀性高…等等問題與挑戰。

全自動Digital Western（即Simple Western）蛋白表達定量系統是一種創新的蛋白質分析技術平台，利用微量毛細管，結合專利內塗層技術，可以自動上膠、加樣、跑膠、紫外交聯蛋白、一抗二抗孵育、顯色、CCD相機直接獲取化學發光信號，通過化學發光信號圖譜進行峰面積定量，定量後的數值再擬合為Western泳道圖，真正體現了全自動Digital Western。

Digital Western（即Simple Western）不需製膠亦不需轉漬，降低實驗誤差以及轉漬效率不同產生的再現性問題。包含有三種分子量範圍2-40 kDa、12-230 kDa以及66-440 kDa 可依據實際目標蛋白質大小選擇且以相同實驗流程檢出，避免實驗優化困擾。樣本使用量僅需傳統方法五分之一至十分之一的樣本量。分析模式具有化學發光、兩通道螢光偵測、總蛋白檢測以及 RePlex檢測 (即傳統WB的 Stripping and Reprobing)，具有 System Control得到標準化實驗數據。

Digital Western 工作原理

　

Digital Western 數據結果-以化學發光檢測為例

　

Digital Western 上機流程

Digital Western 特點

●全自動:

吸膠、上樣、跑膠、紫外蛋白交聯、一抗二抗孵育、顯色、化學發光定量全自動完成，無需值守。

●分子量含蓋2-440 kDa:

2-440 kDa，大、小分子量蛋白以相同實驗流程檢出，免於實驗優化的苦惱。

●快速:

單次運行，3小時即可獲得定量數據。

●定量準確，數據可靠:

CCD相機直接獲取化學信號進行自動峰面積定量，峰面積擬合為Western泳道圖，無法更改和塗抹，保留全膜結果，數據可溯源。

●快速:

使用傳統方法五分之一至十分之一的樣本量，除可用於細胞、組織等樣本，在流式分選免疫細胞、腫瘤幹細胞、鐳射顯微切割樣本、臨床穿刺樣本、外泌體、類器官、發育胚胎等方面具有獨到優勢。

Digital Western 應用- EV protein characterization

Meyer et al, Exosome Diagnostics GmbH.

Digital Western 應用-大分子量蛋白 Dystrophin (杜氏肌營養不良症的靶蛋白)表現量

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